
通過CRISPR/Cas系統(sgRNA引導Cas蛋白)在基因組特定位置制造DSB,依賴同源定向修復(HDR)機制,以目標片段的供體DNA為模板完成大片段替換。該技術可實現3Kb以上片段的精準插入或替換。


(1)功能基因研究:利用大片段定點插入技術可插入一些標簽蛋白(如6×HIS、Flag、GST、Myc等)進行功能基因機理研究;亦可用于功能基因UTR區(qū)域的原位插入;
(2)作物新性狀創(chuàng)制:傳統基于農桿菌的轉基因方式插入位置隨機且不精準,使得轉基因性狀轉化體篩選過程繁雜冗長,利用大片段定點插入技術可使外源基因插入到基因組安全港(Genomic safe harbor, GSH)區(qū)域,高效快速的進行新性狀的創(chuàng)制。

(1)自主開發(fā)通過CRISPR/Cas系統與DNA修復相關功能基因、位點特異性重組酶相結合,完成基因組DNA片段的定向插入,定向刪除、同源定向修復以及等位基因替換等事件;
(2)具有穩(wěn)定、高效的植物遺傳轉化體系,可快速獲得片段插入或刪除植株。

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